Full Name of the work head: Бисенбаев Амангельды Куанбаевич
Исполнители проекта:
: Некоммерческое акционерное общество "Казахский национальный университет имени аль-Фараби"
Inventory number: 0322РК00886
Registration number: 0122РК00638
Keywords: Вирус бешенства,Генная инженерия,Иммуноферментный анализ,Наноантитела,Фаговый дисплей
Проведен компьютерный анализ внеклеточного домена G-белка вируса бешенства (RABV-G). Проведена оптимизация G-белка путем замены гидрофобных аминокислот на линкеры (G4S) между аминокислотными остатками 73–79 и 117–125, а также оптимизированы кодоны и содержания GC для оптимальной экспрессии в дрожжах. кДНК ген ExRABVG-GS, кодирующий RABV-G с сигнальным пептидом на N-конце и с-Мус, 6xHis-тэгами на С-конце, клонирован в вектор pBluescript II SK (+). Сконструирован дрожжевой pGAPZα/ExRABVG-GS вектор, содержащий сигнальный пептид, конститутивный промотор GAP, кДНК ген ExRABVG-GS. Проанализирована экспрессия и секреция G-белка дрожжевым штаммом GS115 P. Pastoris в культуральную среду. Показано методом ДСН-ПААГ электрофореза наличие мажорной белковой полосы с молекулярной массой около 51 кДа, соответствующая G-белку. Проведена очистка белка из трёхдневной культуральной среды методами аффинной и ионнообменной хроматографий. Проведена иммунизация кроликов очищенным рекомбинантным белком и получена поликлональная антисыворотка, содержащая антитела против внеклеточного домена G-белка вируса бешенства. Определены титры полученной антисыворотки с помощью непрямого ИФА метода. Проведено осаждение и очистка поликлональных антител. Проанализированы антигенные характеристики эпитопа G-белка вируса бешенства с помощью непрямого ELISA метода с использованием коммерческих доступных моноклональных антител специфичных к G-белку.