Full Name of the work head: Боровиков Сергей Николаевич
Исполнители проекта:
: Казахский агротехнический исследовательский университет имени Сакена Сейфуллина
Inventory number: 0322РК00346
Registration number: 0121РК00100
Keywords: генотипирование,диагностика,моноклональные антитела,рекомбинантные белки,сальмонеллезный аборт лошадей
секвенированы геномы 6 изолятов S.enterica выделенных из патологического материала (аборт плоды) и биологического материала кобыл. Получено 1273672, 1463230, 2793878, 1429426, 869054 и 2023166 прочтений для изолятов S-enterica-Kaz-1-LPG-231, S-enterica-Kaz-3-LPG-235, S-enterica-1-S21R-48, S-enterica-1-S22R-47, S-enterica-NRCV-LPG-664 и S-enterica-NRCV-LPG-665.
Определены консервативные иммунодоминантные эпитопы и нуклеотидные последовательности генов, ответственные за синтез диагностически важных эпитопов S.аbortus equi. Разработаны схемы генетических конструкций на основе векторов pRSET-B, и рЕТ32 несущие ген OmpX белка S. abortus equi. В pET28 векторе ген OmpX белка встроен по сайтам рестрикции EcoRI и BamHI. В плазмидном векторе pET32 ген OmpX встроен по сайтам рестрикции NcoI и XhoI.
Создан штамм E.coli, продуцирующий рекомбинантный белок OmpX. Синтезированы праймеры длиной 25 пар оснований, позволяющие амплифицировать ген OmpX длинной 165 пар оснований из образцов тотальной ДНК. Проведено клонирование гена OmpX в вектор pRSET-B по сайтам рестрикции EcoRI и BamHI.
Очистка рекомбинантных белков проведена металл-хелатной хроматографией на основе никель-сефарозы, получены очищенные препараты антигенов.
Проведена иммунизация мышей линии Balb/c препаратами рекомбинантных антигенов OmpX, от которых выделены иммунные спленоциты и проведена их гибридизация с клетками миеломной линии. Отобрано 10 гибридных клонов, продуцирующих антитела заданной специфичности.
