Full Name of the work head: Манабаева Шуга Аскаровна
Исполнители проекта:
: Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Inventory number: 0322РК00735
Registration number: 0121РК00172
Keywords: CRISPR/Сas9,ген инвертазы,картофель,редактирование,экспрессия
Микроклональное размножение пробирочных растений картофеля сорта Аксор проводилось ежемесячно с помощью черенкования. Для этого растения картофеля, сформировавшиеся 5-6 листочков извлекали из пробирок в асептических условиях и делили на сегменты содержащие отрезок стебля с пазушной почкой и высаживали в питательные среды МС без гормонов. Данная технология позволила обеспечить проект с эксплантами картофеля для агробактериальной трансформации. Agrobacterium-опосредованная трансформация листовых и стеблевых эксплантов картофеля проводилась с помощью генно-инженерных конструкции pMR287+3T, pMR287+3T+P19 и pMR284+3T. Всего трансформировано 925 стеблевых эксплантов и 940 каллусов картофеля сорта Аксор. Частота регенерации у трансформированных стеблевых эксплантов составила 21,27%, тогда как у каллусов 13,33% соответственно. ДНК растений-регенерантов проверяли методом ПЦР на наличие гена Cas9. Из 247 растений-регенерантов, положительный результат показали 60 растений-регенерантов, трансформированные вектором pMR287+3T и 28 растений с вектором pMR287+3T+P19. Далее наличие мутации в геноме растений-регенерантов проанализировали с помощью фрагментного анализа. Отобраны регенеранты предположительно подвергшиеся мутации во всех четырех локусах в третьем экзоне и с частичным гидролизом по сайту ScaI. ДНК всех растений-трансформантов секвенируется и анализируется по 3 таргетным участкам в двух экзонах. Эксперименты продолжаются.