Full Name of the work head: Кулыясов Арман Табылович
Исполнители проекта:
: Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Inventory number: 0322РК00533
Registration number: 0121РК00163
Keywords: жидкостная хроматография тандемная масс-спектрометрия LC-MS/MS,неспецифичное биотинилирование,протеомика,сайт-специфичное биотинилирование,транскрипционные факторы плюрипотентности
1. Получены 4 новых плазмидных конструкций: pOz.TurboID.GFP, pOz.TurboID.Sox2, pOz.TurboID.Oct4 и pOz.TurboID.Nanog. Правильность сборки плазмид, и отсутствие ошибок в нуклеотидной последовательности проверяли с помощью метода секвенирования по Сэнгеру.
2. Оптимизированы условия выделения биотинилированных белков из различных фракций клеток HEK293T и CHO. При этом из стрептавидиновых частиц трех производителей наиболее эффективным оказался Streptavidin Sepharose™ High Performance, 17-5113-01, компании Cytiva.
3. По результатам анализа образцов TurboID-GFP, TurboID-Sox2 и TurboID-Nanog, содержащих биотинилированные белки из клеток HEK293T и CHO с помощью жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрии идентифицированы партнеры указанных рекомбинантных белков.
