Full Name of the work head: Смекенов Изат Темиргалиевич
Исполнители проекта:
: Некоммерческое акционерное общество "Казахский национальный университет имени аль-Фараби"
Inventory number: 0322РК00566
Registration number: 0121РК00273
Keywords: lst,raptor,α-амилаза,абсцизовая кислота,гибберелловая кислота,киназа рибосомного белка S6,мишень рапамицина,пшеница,рапамицин,торин1
Были экспрессированы и очищенны с помощью аффинной хроматографии специфичные эпитопы 6xHis-rTaTOR1, 6xHis-rTaRAPTOR1 и 6xHis-rTaLST8 белков. Получены и очищенны специфические антитела против TaTOR1, TaRAPTOR1 и TaLST8 белков пшеницы. Определены титры полученных антисывороток с помощью непрямого ИФА. Анализ специфичности очищенных антител методом иммуноблоттинга показал, что антитела распознают соответствующие белки при разведений 1:10000. Результат дот-блот лизатов E coli с 6xHis-rTaTOR1, 6xHis-rTaRAPTOR1 и 6xHis-rTaLST8 белками или их очищенных фракций показал сильные сигналы с поликлональными антителами. Методом иммунопреципитации с использованием поликлональных антител в клеточном лизате E coli с использованием G-протеин агарозных шариков удалось осадить белки с соответствующими молекулярными массами. Показано присутствие TaTOR1, TaRAPTOR1 и TaLST8 белков в различных органах пшеницы методом вестерн-блоттинга. Проведена оптимизация функциональной экспрессии кДНК генов GST-TOR-HEAT и GST-TaS6K1 и очистка белковых продуктов клонируемых генов на основе аффинной хроматографии при помощи GSTrap FF колонок. Методом иммунопреципитации в условиях in vitro показано, что TOR и RAPTOR взаимодействуют через HEAT-повторы TOR киназы. Результаты анализа взаимодействия TaS6K1 и TaRAPTOR показало, что TaRAPTOR взаимодействует с N-концевой последовательностью TаS6K1.