Full Name of the work head: Муканов Касым Касенович
Исполнители проекта:
: Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Inventory number: 0322РК00122
Registration number: 0121РК00146
Keywords: гибридома,гликопротеин цитотоксического Т-лимфоцита,,моноклональные антитела,рекомбинантный белок,,Штамм-продуцент
Репрезентативные спектры MS/MS пептида AMHVAQPAVVLASSR рекомбинантного CTLA-4 и их ионов фрагментации соответствовали масс-спектрам белка CTLA4 (Score 5169) представленные в базе данных SwissProt. Определена активность связывания рекомбинантного CTLA-4 с B7-1Fc составляющая ЕС50 150 нг/мл. Отработаны параметры иммунизации мышей, концентрации полиэтиленгликоля (ПЭГ) в гибридизационном растворе, рН раствора ПЭГ, время инкубирования клеток в безсывороточной среде. Было получено 175 клонов в 384 засеянных лунках, что составляет 46% клонообразования. Из полученных клонов 27 (15%) клонов гибридных клеток продуцировали антитела против рекомбинантного CTLA-4 белка. Гибридные клетки, продуцирующие антитела, клонировали трижды. После третьего клонирования из 96 полученных клонов 81 субклон продуцировал антитела к CTLA-4, что составляет 85% положительных клонов. После клонирования клетки гибридомы не изменили своих продуктивных и культуральных свойств в течение 16 пассажей в условиях in vitro (время наблюдения). Впервые в Республике Казахстан получены штаммы гибридных клеток продуценты моноклональных антител против внеклеточного домена CTLA-4 рецептора человека.