Full Name of the work head: Турсунов Канат Ахметович
Исполнители проекта:
: Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Inventory number: 0322РК00212
Registration number: 0121РК00044
Keywords: Диагностика,Иммунохроматография,Моноклональные антитела,Нодулярный дерматит,Рекомбинантный антиген
Изучены иммунологические и диагностические свойства рекомбинантного Р32 антигена вируса нодулярного дерматита. Отработана схема иммунизации лабораторных мышей. Титр антител в непрямом ИФА составил 1:6400 для группы 1 (25 мкг/гол) и 1:102400 для группы 2 (50 мгк/гол). Установлено, что использование для иммунизации рекомбинантного антигена в концентрации 100 мкг/гол вызывает токсический эффект и приводит к гибели животных. При постановке непрямого твердофазного ИФА установлено, что рекомбинантный Р32 антиген реагирует с антителами сыворотки крови КРС вакцинированных против нодулярного дерматита. При отработке параметров ИФА определено, что наиболее оптимальная концентрация рекомбинантного Р32 белка составляет 0,6 мкг/мл, блокировочный раствор – 3% молоко, разведение конъюгата 1:20000. Получены линии гибридных клеток продуцирующие моноклональные антитела против Р32 антигена. При посеве 4-х 96-луночных планшетов (384 лунки), было получено 98 (25,5%) клонов гибридных клеток, из которых методом непрямого твердофазного ИФА было выделено 5 (5%) положительных клонов. При дальнейшем тестировании культуральных и продуктивных характеристик отобрано два клона. Отработаны методы наработки и очистки моноклональных антител. Установлено, что при наработке моноклональных антител методом in vitro, концентрация составляет около 43 мкг/мл с 200 мл среды. При наработке методом in vivo концентрация антител составляет около 4-5 мг/мл.