Характеристика и применение ДНК аптамеров для обнаружения карциноэмбрионального антигена
Full Name of the work head: Канаева Дамира Ашимхановна
Исполнители проекта:
: Nazarbayev University
Inventory number: 0222РК00123
Registration number: 0120РК00159
Keywords: аптамер,Аптасенсор,биомаркер,обнаружение,поперечно-встречный электрод,рак,характеристика,электрохимическая импедансная спектроскопия
За отчетный период (2020–2022 гг.) был проведен биоинформатический анализ аптамерных последовательностей. Также, изучили комплексы при взаимодействии аптамера с белком-мишенью - СЕА. Во время скрининга относительных событий связывания биотинилированных аптамеров (1) – (9) с целевым CEA белком с использованием ELONA, последовательность аптамера (6) показала самое высокое значение OD450. Анализ последовательности аптамера (6) в разных концентрациях выявил увеличение сигнала оптической плотности (OD450) в диапазоне концентрации от 0 до 1500 нМ со значением Kd в наномолярном диапазоне - 311,7 нМ и хорошей специфичностью. В этом исследовании также был использован SPR для дальнейшей оценки последовательности аптамера (6) против целевого белка CEA. Исследование чувствительности EIS показало, что предел детекции CEA в буфере и в разведенных образцах сыворотки крови человека с использованием ЭИС аптасенсора составляет 5,02 пг/мл и 4,92 пг/мл, соответственно, а время детекции составляло всего 25 мин. Мы также изучили поверхность IDE с помощью АСМ, что также дало нам возможность продемонстрировать успешную функционализацию и детекцию СЕА. Результаты конфокальной микроскопии визуально подтвердили связывание последовательности аптамера (6) с белком- мишенью СЕА на клеточных культурах экспрессирующие СЕА.