Разработка технологии получения рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека в растениях
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Манабаева Ш.А., Абеуова Л.С., Мухаметжанов Н.С.
: Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан
Inventory number: 0215РК02213
Registration number: 0114РК00338
Keywords: вирусный вектор*вирус*томаты*гранулоцитарный колониестимулирующий фактор*транзиентная экспрессия
Получен вирусный вектор Т-ВККТ-ГМКСФ, который несет неполные кодирующие последовательности генома ВККТ с геном рчГМ-КСФ, помещенных непосредственно за эукариотическим промотором 35S вируса мозаики цветной капусты СаМV и перед эукариотическим терминатором, что обеспечивает его транскрипцию в эукариотическом геноме. Проведена Agrobacterium - опосредованная инфильтрация растений N.benthamiana с помощью суспензии A.tumefaciens, несущей рекомбинантную конструкцию Ti-ВККТ- ГМ-КСФ в условиях in planta. Достигнута локальная инфекция вирусом ККТ и транзиентная экспрессия белка рчГМ-КСФ in planta. Проведена оптимизация протокола выделения рекомбинантного ГМ-КСФ человека из растительной ткани. Транзиентная экспрессия белка рчГМ-КСФ в растениях N.benthamiana проверена методом Вестерн блоттинг с помощью специфических моноклональных антител к полигистидину. Колонки Ni2+-NTA-агароза использованы для очистки рекомбинантного белка Г-КСФ человека.
