Разработка технологии получения рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека в растениях
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Манабаева Ш.А., Рахимжанова А.О., Дауров Д.Л., Абеуова Л.С., Макенова А.Т.
: Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан
Inventory number: 0214РК02429
Registration number: 0114РК00338
Keywords: вирусный вектор*кустистая карликовость томатов*генная инженерия*рекомбинантные белки
Проведен дизайн генома вируса кустистой карликовости томатов (ВККТ) для получения генно-инженерной конструкции, проанализирована последовательность гена, кодирующего белок оболочки и сайты, узнаваемые различными рестриктазами. Аминокислотная последовательность ГМ-КСФ оптимизирована посредством присоединения к ней коротких аминокислотных меток (6xHis), сайта расщепления энтеропептидазой (DDDK) и линкеров для клонирования. С целью проведения очистки при помощи аффинной хроматографии в генетическую конструкцию была введена последовательность, кодирующая полигистидиновый домен (6xHis). Сайт гидролиза энтеропептидазой DDDK был запланирован для обеспечения возможности удаления гистидиногового участка в процессе очистки целевого белка в генетической конструкции между аффинным доменом 6xHis и последовательностями целевого белка. На краевых участках гена ГМ-КСФ были введены сайты гидролиза, узнаваемые эндонуклеазами NotI и AgeI, необходимые для последующего клонирования кодирующего фрагмента в экспрессионный вектор. В результате двухэтапного химического синтеза с помощью ПЦР был получен ген, кодирующий рчГМ-КСФ длиной 438 пар нуклеотидов. Сущность новизны результатов исследования состоит в том, что вирус кустистой карликовости томатов впервые изучается в качестве экспрессионной системы рекомбинантного белка ГМ-КСФ человека в растениях. Производство рекомбинантных аналогов природных белков фармацевтического применения является актуальным для Казахстана. В настоящее время в Казахстане зарегистрированы и имеются в продаже рекомбинантные импортные препараты ГМ-КСФ человека (Лейкомакс, активное вещество - молграмостим).