Разработка комплексных профилактических мероприятий против актуальных заболеваний животных дикой фауны
Руководитель проекта: Сансызбай А.Р.
Исполнители проекта: Кошеметов Ж.К., Булатов Е.А.
Организация: Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности
Инвентарный номер: 0214РК02087
Регистрационный номер: 0114РК00100
Ключевые слова: дикая фауна*вирус*бешенство*болезнь ауески*культура клеток*культивирование*вакцина*полимеразная цепная реакция*специфические праймеры*антиген*сыворотка*инфекционные болезни животных
Отработаны оптимальные параметры культивирования вируса бешенства в стационарных, роллерных и суспензионных условиях. Подобраны наиболее чувствительные культуры клеток, инфицирующие дозы вируса и установлена продолжительность культивирования. Проведена работа по определению биологической активности и стерильности вирусной биомассы. В результате проведенных исследований по изучению показателей безопасности и иммунитета при иммунизации разработанным вакцинным препаратом, установлено, что при скармливании 10-кратной дозы щенкам, через 10-20 сут. наблюдения в пробах слюны и крови не удалось выявить антиген вируса бешенства. Вследствие чего можно сделать вывод, что штамм \"VRC-RZ2\" является безопасным для животных. Исследования по изучению иммуногенности разработанной вакцины проводили на 10 щенках, из которых 8 щенков иммунизировали в дозе 6,50 ТЦД50 и двух щенков оставляли в качестве контроля. В результате проведенных исследований, установлено, что при иммунизирующей дозе 6,50 ТЦД50 у животных через 14 сут. после вакцинации уровень ВНА составляет 2,00-2,75 log[2]. Через 30 сут титров ВНА в сыворотках крови животных составил 2,50-3,50 log[2]. При контрольном заражении 2 не вакцинированных щенка заболели и пали. Оптимизирован ОТ-ПЦР для диагностики бешенства. Оптимизированный метод ОТ-ПЦР позволяет специфически выявлять РНК ВБ в искомой пробе и не даҒт перекрҒстных реакций с гетерологичными и отрицательными контрольными пробами. Чувствительность метода ПЦР составила 0,6 пг РНК ВБ в пробе. Полученные результаты демонстрируют высокую специфичность и чувствительность отработанного метода ПЦР. Для разработки метода ИФА при БА необходимо было отработать оптимальный метод приготовления очищенных и концентрированных антигенов вируса БА, пригодных для иммунизации животных, получить активные и специфичные антисыворотки и на их основе приготовить диагностические препараты для метода ИФА. Приготовленные антигены были исследованы на активность и специфичность в РДП. Установлено, что более активные антигены получены с применением второго способа очистки. Активность их в РДП составила 1:4-1:32. Для получения сывороток к вирусу БА были использованы козы, кролики и морские свинки. На каждом виде животных было испытано по одной схеме иммунизации их приготовленными по двум методам антигенами вируса БА. Сыворотки, полученные на морских свинках, показали отрицательный результат в РДП, но кроличьи сыворотки были положительными в непрямом варианте ИФА до разведения 1:400-1:800 и в РДП 1:2. Козьи сыворотки показали положительный результат в РДП до разведения 1:2 и в ИФА 1:25600. Таким образом, более активные сыворотки к ВБА приготовлены на козах.