ИФА-тест на основе рекомбинантного белка внешней мембраны возбудителя бруцеллеза
Full Name of the work head: Куйбагаров М.А.
Исполнители проекта: Булашев А.К., Сураншиев Ж.А., Киян В.С. и др.
: Научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии
Inventory number: 0217РК00974
Registration number: 0115РК02413
Keywords: Бруцеллез*диагностика*белки внешней мембраны*комбинированный рекомбинантный белок*иммуноферментный анализ
Исследован диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота (КРС). Изучена антигенность рекомбинантных белков внешней мембраны (БВМ) бруцелл БВМ31 и БВМ25 в непрямом имуноферментном анализе (н-ИФА) на образцах сывороток крови КРС с положительными результатами на бруцеллез по реакциям агглютинации и связывания комплемента; установлено, что БВМ31 по своей антигенности существенно уступает БВМ25, однако у отдельных серопозитивных животных противобруцеллезные антитела, наоборот, проявляют активность против БВМ31, но не связываются с БВМ25. Создан штамм Е. coli ВL21(DE3)/рЕТ32- продуцент комбинированного белка БВМBm-Ba бактерий рода Brucella, состоящий из наиболее иммунодоминантных участков БВМ31 и БВМ25, и депонирован в РГП <Республиканская коллекция микроорганизмов> под номером ө B-RKM 0741. Определена диагностическая ценность н-ИФА на основе БВМ31, БВМ25 и БВМBm-Ba в сравнении с известными серологическими реакциями, бактериологическим анализом и полимеразно-цепной реакцией. Разработан Лабораторный регламент изготовления и использования компонентов набора <ИФА-тест для серологической диагностики бруцеллеза>, а также изготовлен его опытный образец; подана заявка на получение патента РК на <Штамм микроорганизма E. coli BL21(DE3)/pET32/OmpBmBa - продуцент рекомбинантного химерного белка внешней мембраны>. Научной новизной проекта является создание штамма Е. coli ВL21(DE3)/рЕТ32 -продуцента комбинированного белка бактерий, состоящего из наиболее иммунодоминантных участков двух БВМ бруцелл с мол.м. 25кДа и 31кДа.