Изучение влияния различных криопротекторов и разных режимов замораживания на выживаемость плюрипотентных клеток и фибробласты овец
Full Name of the work head: Тойшибеков М.М.
Исполнители проекта: Тойшибеков Е.М., Ибраимова И.М., Тойшибеков М.М.
: Институт экспериментальной биологии им. Ф.Мухамедгалиева
Inventory number: 0215РК01661
Registration number: 0115РК00423
Keywords: Плюрипотентные клетки*Фидер*Фибробласты*Криобиология
Изучены методы выделения плюрипотентных клеток из внутриклеточной массы бластоцист после хэтчингаи и путем лизиса прозрачной оболочки бластоцисты. При этом зону пеллюцида лизировали раствором проназы. При отработке методов культивирования плюрипотентных клеток, в культуральную среду добавляли различные компоненты, блокирующие их спонтанную дифференцировку. Отработана методика безфидерного культивирования плюрипотентных клеток в синтетической питательной среде. Поскольку одной из основных особенностей плюрипотентных клеток является высокая активность щелочной фосфатазы, свидетельствующей о сохранении этими клетками плюрипотентного статуса, был проведен тест на анализ экспрессии щелочной фосфатазы. Недифференцированные ПК имели активность щелочной фосфатазы, которая была детектирована фиксацией клеток 4% параформальдегидом и затем проявлением с использованием Fast Red TR в качестве субстрата. Отработана методика выделения и культивирования фибробластов овец для пополнения криобанка линиями соматических клеток.