Молекулярная характеристика независимых от ДНК-гликозилаз путей инцизионной репарации нуклеотидов в растениях
Full Name of the work head: Бисенбаев А.К.
Исполнители проекта: Тайпакова С.М., Бисенбаев А.К.
: Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии при КазНУ им. аль-Фараби
Inventory number: 0215РК01033
Registration number: 0115РК00284
Keywords: Эндонуклеаза*Гликозилаза*Эксцизионная репарация ДНК
Выделена и дана характеристика кДНК гену atArp. Проведена функциональная экспрессия atArp в E. coli и очистка рекомбинантного белка. С помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии установлена принадлежность рекомбинантного белка к семейству ExoIII АР-эдонуклеаз. Исследована зависимость активности atArp от общей ионной силы, значения рН, концентрации MgCl2 и температуры. Оптимальные условия реакции для atArp протекают при широком диапазоне значений рН (6-9) и ионной силе (0 - 250 мМ KCl), высокой концентрации двухвалентных катионов (5 мM) и при температуре инкубационной среды 37әC. Получены антитела к atArp, которые могут использоваться для анализа уровня этого белка в клетках растений при оценке их репарационного статуса. Иммуноблотинг экстрактов разных частей Arabidopsis thaliana показало, что atArp присутствует во всех тканях растений, что свидетельствует о важности данного фермента в ходе роста и развития растений. Изучение кинетических параметров показало что, atArp проявляет существенную АР-эндонуклеазную и 3\'5\' экзонуклеазную активность. Выявлены оптимальные стандартные условия для NIR активности. Показано, NIR активность протекает при низких значениях рН, низкой концентрации MgCl2 и низком значений ионной силы реакционной смеси.