Разработка технологии получения гликопротеина gp51 вируса лейкоза крупного рогатого скота в растениях
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Манабаева Ш.А., Абеуова Л.С.
: Национальный центр биотехнологии
Inventory number: 0215РК02360
Registration number: 0115РК01776
Keywords: вирусный вектор*вирус карликовости томатов*антигены*вирус лейкоза КРС*транзиентная экспрессия
Проведен дизайн генно-инженерной конструкции для транзиентной экспресии рекомбинантного антигена GP51 ВЛКРС с использованием вирусного вектора, созданного на основе генома вируса кустистой карликовости томатов. Проведен дизайн и синтез олигонуклеотидных праймеров для получения кодон оптимизированной нуклеотидной последовательности антигена GP51 ВЛКРС de novo. Состав кодонов нуклеотидной последовательности антигена gp51 ВЛКРС для экспрессии в растениях N.benthamiana оптимизирован с помощью программы DNA2.0 (http://www.dna20.com). GP51 модифицирован посредством присоединения к белку на N-конец коротких аминокислотных меток (6 x His) для облегчения его очистки из растительного материала с помощью металлоаффинной хроматографии и на С-конец последовательности SEKDEL (сигнал локализации) для его удержания в эндоплазматическом ретикулуме. Проведен синтез последовательности антигена GP51 ВЛКРС de novo и клонирование в плазмидах E.coli с использованием неэкспресионного вектора. Подтверждена структура антигена с помощью секвенирования. Создан вирусный вектор pAB-GP51 на основе генома ВККТ для экспрессии в растениях рекомбинантного антигена GP51 ВЛКРС. Рекомбинантный ген помещен за эукариотическим промотором 35S вируса мозаики цветной капусты СаМV и перед эукариотическим терминатором, в составе генома ВККТ, что обеспечивает транскрипцию GP51 в растительном геноме.