Разработка тест-системы для серологической диагностики лептоспироза на основе рекомбинантного антигена LipL32
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Ескендирова С.З., Сарина Н.И., Манат Е.
: Национальный центр биотехнологии
Inventory number: 0215РК02149
Registration number: 0115РК01867
Keywords: лептоспироз*иммунодиагностика*гены*праймеры*рекомбинантный белок*плазмида
Проведено моделирование гена и дизайн in silico генетических конструкций для синтеза рекомбинантного антигена лептоспир - LipL32. Подобраны первичные структуры олигонуклеотидов для синтеза целевого гена LipL32 с последовательностями, кодон-оптимизированными для экспрессии в E. coli. Методом твердофазного амидофосфитного синтеза на автоматическом ДНК-синтезаторе получены олигонуклетидные праймеры для синтеза целевого гена LipL32 de novo и проведена очистка олигонуклеотидов до чистоты >95 %. Проведен синтез de novo в синтетической ПЦР гена LipL32, который затем клонирован в составе высококопийных неэкспрессионных бактериальных плазмид и в составе экспрессирующей конструкции на основе вектора для бактериальной экспрессии pET22. Проведен эксперимент по оценке накопления рекомбинантного антигена LipL32 в культурах экспрессирующего штамма BL21(DE3), трансформированного полученной конструкцией pET22/LipL32. Определены оптимальные параметры культивирования штаммов - продуцентов для экспрессии рекомбинантного белка, оптимизация условий и экспрессии рекомбинантного белка.