Разработка биотехнологии получения рекомбинантных белков медицинского назначения из трансгенных растений на примере белка крови человека альфа-фетопротеина
Full Name of the work head: Жамбакин К.Ж.
Исполнители проекта: Искаков Б.К., Станбекова Г.Э., Надирова Л.Т.
: Институт биологии и биотехнологии растений
Inventory number: 0215РК01324
Registration number: 0115РК01851
Keywords: биотехнология*генетически модифицированные растения*альфа-фетопротеин человека
Выделены очищенные препараты тотальной РНК из культуры клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека. Сопряженные реакции обратной транскрипции и полимеразная цепная реакция с синтетическими праймерами амплифицировали полноразмерный кДНК-ген альфа-фетопротеина человека. Проведено клонирование полученного кДНК фрагмента в вектор pET19b. Рекомбинантной плазмидой pET19b(AFPh) проведена трансформация E.coli штамма BL21(DE3) pLysS. Вестерн-анализ показал присутствие в клетках белка, соответствующего белку альфа-фетопротеина человека. Показана экспрессия целевого гена в гетерологичной системе - клетках бактерии E.coli. Получены рекомбинантные плазмиды для транскрипции мРНК альфа-фетопротеина человека с различными 5\'-нетранслируемыми последовательностями. Трансляция мРНК показала, что в растительной бесклеточной системе из зародышей пшеницы может корректно синтезироваться альфа-фетопротеин человека.
