Разработка серологического метода детекции белка - маркера Her-2/neu в сыворотке крови больных раком молочной железы
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Ескендирова С.З., Сарина Н.И., Манат Е.
: Национальный центр биотехнологии
Inventory number: 0215РК02353
Registration number: 0115РК01796
Keywords: рак молочной железы*иммунодиагностика*гены*рекомбинантный белок*плазмида*штаммы-продуценты
Проведен дизайн in silico генетических конструкций для синтеза рекомбинантного белка-маркера внеклеточного домена трансмембранного рецептора Her-2/neu в клетках прокариот и эукариот. Для создания прокариотического штамма-продуцента рекомбинантного белка-маркера Her-2/neu проведено клонирование гена ErbB-2 из плазмиды pcDNA3/ErbB-2 на основе вектора для бактериальной экспрессии pET-28c. Для создания эукариотического штамма-продуцента рекомбинантного белка-маркера Her-2/neu проведено клонирование гена ErbB-2 в дрожжевой экспрессионный вектор pPICZA с использованием вектора pcDNA3/ErbB-2 в качестве матрицы. В результате амплификации гена получен ПЦР-продукт с соответствующей длиной гена - 3765 bp. В плазмидной ДНК клонов, отобранных после трансформации, отсутствовали мутации в виде делеций, инсерций и замен. В лизатах клеток положительных клонов штаммов Escherichia coli - L21(DE3), Rosetta(DE3) и ArcticExpress(DE3)RP, трансформированных полученной конструкцией pET-28c(+)/6His-Her2-6His, и штаммов дрожжей P. pastoris X-33 и GS115, трансформированных полученной конструкцией pPICZ A/Her-2/neu PmeI (MssI), наблюдается присутствие белка, который предположительно является целевым белком-маркером Her-2/neu. Впервые в РК предложена иммуноферментная тест-система для определения уровня растворимого HER-2/neu в сыворотке крови больных РМЖ.
