Разработка вирусного вектора для получения рекомбинантных белков в растениях
Full Name of the work head: Жамбакин К.Ж.
Исполнители проекта: Галиакпаров Н.Н.
: Институт биологии и биотехнологии растений
Inventory number: 0215РК01756
Registration number: 0115РК00219
Keywords: вирусный вектор*рекомбинантные гены*вакцины*вирус А винограда
Исследован инфекционный клон вируса А винограда. Изучен вирусный вектор с использованием стратегии \"целого\" вируса для продукции рекомбинантных белков в растениях. Проведен дизайн и синтез праймеров для модификации инфекционного клона вируса А винограда с целью внедрения сайтов рестрикции, удаления стоп кодонов, клонирования последовательностей 2А пептидов, а так же генов вируса. В связи с большим размером вирусного генома, проделана работа по разделению инфекционного клона на фрагменты, обратная сборка полного вирусного генома и инокуляция растений N. benthamiana, на которых проявились симптомы характерные для вируса А винограда. Собранный полный геном вируса с геном GFP и пептидами 2А между ОРС4 и ОРС5 вызвал инфекцию у N. benthamiana после механической инокуляции. Наблюдение с использованием флуоресцентного микроскопа показало наличие кластеров клеток зеленого цвета, указывающие на экспрессию белка GFP. Так же создана конструкция для экспрессии гена интереса между ОРС3 и ОРС4. Район перекрытия этих ОРС дуплицирован, сохраняя аминокислотную последовательность ОРС4, но с внесением 30% различия в нуклеотидной последовательности, для стабилизации генома. Между стоп кодоном ОРС3 и дуплицированным регионом вставлены последовательности кодирующие 2А пептиды и ген GFP. Эта конструкция так же вызывала симптомы вируса в растениях N. benthamiana.