Ірі қара мүйіздінің нодулярлық дерматитің алдын-алу үшін тірі аттенуирленген өсінділі вакцинаны жасап шығару
Руководитель проекта: Орынбаев Мухит Бармакулы
Исполнители проекта: Орынбаев М. Б., Червякова О.В., Нисанова Р.К.
Организация: Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности
Инвентарный номер: 0218РК00474
Регистрационный номер: 0118РК01194
Ключевые слова: НОДУЛЯРНЫЙ ДЕРМАТИТ, ВАКЦИНА, БЕЗВРЕДНОСТЬ, АТТЕНУАЦИЯ, ДЕЛЕЦИЯ
"Объектом исследования является возбудитель нодулярного дерматита - вирус типа Neethling.
Цель проекта - разработка средств специфической профилактики нодулярного дерматита КРС с использованием классических и молекулярно-генетических методов на основе эпизоотически актуального штамма выделенного на территории Казахстана.
Методы проведения работы - в процессе работы использовались вирусологические, молекулярно-биологические методы исследований.
При выполнении НИР применялось следующее оборудование: ШББ, термостаты, микроскопы, амплификаторы, холодильники, центрифуги, аналитические и торсионные весы, сушильные шкафы, мерные цилиндры, колбы, чашки Петри, пипетки.
В результате последовательных и перемежающихся пассажей на культурах клеток и развивающихся куриных эмбрионах получен аттенуированный штамм ВНД КРС.
Установлено, что максимальное накопление вируса нодулярного дерматита происходит при множественности заражения 0,01-0,1 ТЦД50/кл, перевиваемой линии культуры клеток МДВК или первично-трипсинизированной культуры клеток ТЯ и инкубировании при 37 °С в течение 7-8 суток. Соблюдение указанных параметров обеспечивает получение вируса с биологической активностью до (6,58 ± 0,14) lg ТЦД50/см3.
В результате анализа генома вируса НД выбрано пять генов 005, 008, 020, 066 и 142, которые определяют патогенность поксвирусов блокируя как неспецифические, так и специфические реакции иммунной системы макроорганизма.
Для нокаута выбранных генов сконструированы плазмиды интеграции pIN- LSDV005Δ,pIN-LSDV008Δ pIN-LSDV142Δ, pIN-LSDV020-GFPpIN-LSDV066-GFPна основе вектора pP7.5Kgpt.
Область применения - ветеринарная вирусология, биотехнология.
"