Разработка научных основ сохранения ex situ животных родов Ovis и Capra
Full Name of the work head: Тойшибеков М.
Исполнители проекта: Тойшибеков Е.М.*
: Институт экспериментальной биологии им. Ф.Мухамедгалиева
Inventory number: 0214РК02491
Registration number: 0112РК00950
Keywords: сперматозоид*яичник*фибробласт*криоконсервация*овцы*козы*витрификация*
Выявлено, что применение методов быстрого замораживания (витрификации) более эффективны для криосохранения жизнеспособности ооцитов овец и коз, т.к. после применения этих методов большее количество ооцитов сохраняют свою основную функцию - способность к дальнейшему оплодотворению и развитию. Установлено, что применение уравновешенной криоконсервации с использованием криопротекторов 1,5М этиленгликоль и 1,5М пропиленгликоль, а также витрификации (VS) при температуре - 196{o}С и при ультрабыстрой витрификации при сверхнизкой температуре (SCURV) - 205{o}С вызывают морфологические повреждения у меньшего количества заморожено-оттаянных эмбрионов. Установлено, что наиболее оптимальными методами для крисохранения фибробластов овец являются уравновешенная криоконсервация при использовании криопротекторов 1,5М DMSO 1,5М этиленгликоль, а также витрификация при температуре - 196{o}С при использовании витрификационного раствора 25 % этиленгликоль + 25 % глицерин. При суперовуляции, стимулированной у взрослых овцематок в эстральном периоде гормональными препаратами, резко увеличиваются масса и линейные промеры яичника. Средняя масса яичника у подопытных овцематок превосходит массу яичника контрольных овцематок на 113,36 %. Микроскопическое строение желтых тел в яичниках овцематок, обработанных гормональными препаратами, указывает, что стимулированные к росту и развитию овариальные фолликулы созревают и овулируют разномоментно. Желтое тело, образованное в яичнике в ходе предыдущего полового цикла, в эстральной стадии последующего цикла находится в состоянии фиброзного замещения. Отработана технология получения монокультуры фибробластов без применения ферментов из образцов кожи овец и коз, позволяющая накапливать клеточную массу путем многократного пассирования. Отработана технология десорбции и дезагрегации культуры фибробластов с использованием теплого трипсина для проведения пассажа и криоконсервации. Отработана методика криоконсервации фибробластов с использованием пенополистирольного блока с ячейками для криопробирок с толщиной стенок 1 см и ДМСО в качестве криопротектора. Установлено, что выживаемость фибробластов овец при использовании пенополистирольного блока составляет 44,5 (+,-) 6,2 % при исходном уровне живых клеток 98,3 (+,-) 0,5 %. Установлено, что после размораживания фибробласты при культивировании достигают уровня конфлюенции уже через 7 суток. Установлено, что использование криопротектанта пропиленгликоль приводит к негативным результатам криоконсервации ооцитов овец и коз как при использовании меньших, так и при использовании больших концентраций. Отработана технология десорбции и дезагрегации культуры фибробластов коз с использованием теплого трипсина для проведения пассажа и криоконсервации.*