Разработка тест-системы для диагностики бешенства животных методом непрямого иммуноферментного анализа
Full Name of the work head: Куришбаев А.К.
Исполнители проекта: Есенеева С.С.*
: Казахский агротехнический университет им. С.С.Сейфуллина
Inventory number: 0214РК00516
Registration number: 0113РК00754
Keywords: Тест-система*Антирабическая сыворотка*Иммуноферментный анализ*бешенство животных*
Изучено влияние температуры и продолжительность инкубации на адсорбцию антигена на полистироловый планшет, при этом определено, что адсорбция антигена в течение 3 ч является наиболее приемлемой для проведения иммуноферментного анализа (ИФА). При установлении сенсибилизирующей дозы антигена максимальное значение коэффициента специфичности отмечается при адсорбциии антигена вируса бешенства "Овечий" ГНКИ в концентрации 25 мкг/мл, при этом происходила полная инактивация активных центров полистиролового носителя. Изысканы оптимальные условия адсорбции иммунной сыворотки на сенсибилизированном антигеном планшете. Оптимальным сроком инкубации специфических антител с иммобилизованным антигеном является 2 ч при +37 {o}С. При этом достигается максимальная чувствительность реакции (титр антител в ИФА составил 1:100000 при (К[сп1] = 2,3 (+,-) 0,02; К[сп2] = 2,2 (+,-) 0,02). Изучено взаимодействие антивидового иммунопероксидазного конъюгата с комплексом антиген-антитело. Максимальная чувствительность ИФА достигается при 1-часовом взаимодействии конъюгата с иммунной сывороткой. Дальнейшее увеличение времени экспозиции не обеспечивало повышения чувствительности ИФА вследствие возрастания фоновых реакций. Оптимальной концентрацией антивидового конъюгата является разведение 1:800. В этом случае титр антител был максимальным и составлял 1:6400 при К[сп1] = 2,1 (+,-) 0,1; К[сп2] = 2,2 (+,-) 0,2.*