Разработка технологии транзиентной продукции целевых белков в растениях
Full Name of the work head: Раманкулов Е.М.
Исполнители проекта: Манабаева Ш.А.*
: Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан
Inventory number: 0214РК02399
Registration number: 0112РК00351
Keywords: рекомбинантные белки*белки*
Разработана система транзиентной продукции рекомбинантного белка Г-КСФ человека в растениях in planta при помощи рекомбинантной конструкции Ti-ВККТ-ГКСФ, созданной на основе генома вируса кустистой карликовости томатов (ВККТ). Белковая фракция растительных экстрактов изучена методом электрофоретического разделения белков в ПААГ и экспрессия белка рчГ-КСФ подтверждена с помощью Вестерн-блот анализа с помощью специфических моноклональных антител к гранулоцитарному колоние-стимулирующему фактору человека. Разработаны условия очистки рчГ-КСФ из суммарного белкового экстракта растительной ткани вручную, далее для очистки рчГ-КСФ из экстракта растительных клеток был использован метод металло-аффинной хроматографии на Ni{2+}-NTA-агарозе. Белковую фракцию растительных экстрактов изучали методом Лоури. Методом иммуноферментного анализа определена концентрация рекомбинантного белка рчГ-КСФ экспрессированного в клетках растений. Биологическая активность рчГ-КСФ изучена с помощью клеток костного мозга больного лейкемией L41-М (клон линии J-96). Сущность новизны результатов исследования состоит в том, что вирус кустистой карликовости томатов впервые изучен в качестве экспрессионной системы рекомбинантного белка Г-КСФ человека в растениях. Разработана технология транзиентной продукции целевых белков GFP и рчГ-КСФ в растениях, при помощи рекомбинантных конструкций Ti-ВККТ-GFP и Ti-ВККТ-ГКСФ, созданных на основе генома ВККТ, с помощью Agrobacterium - опосредованная инфильтрация растений N.benthamiana.*