Разработка биотехнологии криоконсервации клеточных культур и создание банка гермоплазмы отечественных и зарубежных сортов винограда
Full Name of the work head: Жамбакин К.Ж.
Исполнители проекта: Ковальчук И.Ю. Турдиев Т.Т.*
: Институт биологии и биотехнологии растений
Inventory number: 0214РК01509
Registration number: 0112РК00206
Keywords: виноград*растения in vitro*криоконсервация*хладохранение*
Определены протоколы и питательные среды для введения и клонального микроразмножения винограда в культуру и in vitro. Оптимизированы условия сохранения винограда in vitro при низкой положительной температуре (+8С). Установлено, длительное хладохранение винограда in vitro, оптимально проводить на основе среды Мурасиге и Скуга, отличающейся пониженным содержанием азотсодержащих солей (25 или 50 %), присутствием 0,1-0,5 мг/л абсцизовой кислоты и 2 % маннита или 2 % маннита + 2 % сахарозы. Определено, что перед помещением на хладохранение необходима предварительная адаптация растений в условиях с заданной освещенностью, 16-ти часовым фотопериодом и температурой +23-25 {о}С, а затем акклиматизация растений - одна неделя при 8 ч +22 {o}С - день и 16 ч +4С {o} - ночь. На основе проведҒнных исследований составлен протокол длительного сохранения винограда в условиях сниженного метаболизма. Оптимизированы условия криоконсервации меристематических тканей винограда в жидком азоте (-196 {o}С). Для замораживания меристематических тканей в жидком азоте необходимо низкотемпературное закаливание пробирочных растений в течение четырех-пяти недель в климакамере с переменной температурой и заданной освещенностью: 8 час +22 {o}С при заданной освещенности и 16 час, -1 {o}С в темноте. Лучшим методом криоконсервации меристематических тканей винограда является метод витрификации (модификация - 0,3М сахароза и 2М глицерин с криопротектором PVS2 или криопротектором 50 % глицерин + 50 % глюкоза) или инкапсуляции-дегидратации. Определены режимы вывода меристематических тканей из состояния глубокого охлаждения и регенерации из них целых растений. Оптимизированы условия криоконсервации изолированных спящих почек в жидком азоте (-196 {o}С). Определены режимы размораживания почек после глубокого замораживания и регенерации из них целых растений. Создан криобанк ценных генотипов, состоящих из 30 сортов винограда. Список коллекции включен в Международную базу данных Botanic Gardens Conservation International (BGCI).*