Разработка инновационных средств и методов диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота
Full Name of the work head: Сансызбай А.Р.
Исполнители проекта: Сандыбаев Н.Т., Кошеметов Ж.К.*
: Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности
Inventory number: 0214РК02090
Registration number: 0112РК01018
Keywords: бруцеллез*полимеразная цепная реакция*белковые микрочипы, иммунохроматографический анализ*диагностика бруцеллеза*ветеринарная диагностика*
Разработаны способы идентификации бактерий рода Brucella и вида B.abortus методом полимеразной цепной реакции. На основании анализа бактериальных геномов были сконструированы специфические праймеры для ПЦР. Отработаны условия постановки реакции: компонентный состав реакционной смеси, температурно-временной режим. Показана 100%-ная специфичность разработанного способа диагностики на основе ПЦР и высокая чувствительность. Метод позволяет выявлять 0,5 - 0,8 пг бактериальной ДНК или 10-20 микробных клеток в 1 мл исследуемой пробы. Разработанная тест-система на основе ПЦР рекомендована к использованию при постановке диагноза на бруцеллез путем выявления бактериальной ДНК в органах и биологических жидкостях инфицированных животных. Тест может быть использован в микробиологических лабораториях для идентификации выделенных бактериальных культур. На основе бактериально-экспрессированных рекомбинантных белков бруцелл разработаны два непрямых метода диагностики бруцеллеза. Белковый микрочип на основе четырех антигенных белков BCSP31, BP26, Omp19 и НА позволяет с высокой специфичностью выявлять антибруцеллезные антитела в сыворотках крови инфицированных животных. Для проведения экспресс-диагностики методом иммунохроматографического анализа разработаны тест-полоски на основе антигенного белка бруцелл ВР26. Показано, что тест-полоска по чувствительности не уступает иммуноферментному анализу. С использованием гетерологичных сывороток подтверждена специфичность разработанного ИХА. После проведения производственных испытаний разработанные на основе современных методов диагностические тест-системы рекомендуется внедрить в практику ветеринарных лабораторий республики для постановки диагноза на бруцеллез у крупного рогатого скота. Использование современных методов анализа повысит эффективность постановки диагноза и будет способствовать обеспечению контроля распространения инфекции и ветеринарной безопасности страны.*