Исследование внутриклеточных гормонозависимых сигнальных систем алейронового слоя зерна пшеницы
Full Name of the work head: Бисенбаев А.К.
Исполнители проекта: Бисенбаев А.К.*
: Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии при КазНУ им. аль-Фараби
Inventory number: 0214РК01181
Registration number: 0112РК00199
Keywords: пшеница*TOR-киназа зерна*полимераза*кДНК ген*рекомбинантный белок*фосфороакцепторная аминокислота*протопласта зерна*трансляция ферментов*
Получены антитела к консервативным пептидам и с помощью иммунопреципитации и масс-спектрометрического анализа показана их специфичность к TOR-киназе кукурузы и пшеницы. Ингибиторы TOR-киназы значительно задерживают рост корня и колеоптила зерна пшеницы. Выявлено, что эффекты гибберелловой кислоты (ГК) на синтез альфа-амилазы и ферментов антирадикальной защиты опосредуются активацией TOR-киназной системы. Впервые выделен кДНК ген TaS6K пшеницы с применением реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Осуществлена функциональная экспрессия TaS6K в Е. coli и очищена с помощью никель основанной аффинной хроматографией до гомогенного состояния. С помощью масс-спектрометрии установлена принадлежность рекомбинантного белка к семейству AGC киназ. На основе транзиентной экспрессии плазмидной ДНК, содержащей кДНК ген myc-TaS6K в мезофильных протопластах пшеницы, выявлено, что фосфоакцепторная аминокислота Ser-466 TaS6K фосфорилируется TOR-киназой. В экспериментах in vivo получены данные о функционировании сигнальной системы TOR/S6K на уровне фосфорилирования S6K и S6 в клетках щитка зерна пшеницы. Показано, что активированный TOR-киназой S6K фосфорилирует фактор инициации трансляции eIF3h в составе eIF3c комплекса, а также рибосомальный белок S6. Высказано предположение, что фосфорилирование eIF3h и S6, приводит к усилению трансляции гидролитических ферментов в щитке зерна пшеницы.*