Разработка новых методов количественной оценки взаимодействий белка-онкомаркера лейкемии НР1
Full Name of the work head: Момыналиев К.Т.
Исполнители проекта: Кулыясов А.Т.*
: Национальный центр биотехнологий
Inventory number: 0213РК02243
Registration number: 0112РК00349
Keywords: Плазмиды*гены человеческого гетерохроматинового белка НР1*онкомаркеры лейкемии*масс-спектрометрия*иммуноблот*
Рассмотрена разработка методов, позволяющих проводить количественную оценку взаимодействия гетерохроматиновых белков НР1, онкомаркеров лейкемии. В результате работы получены, охарактеризованы и наработаны плазмидные конструкции pcDNA3.1(+).BAP.Tap54b и pcDNA3.1(+).BirA.Tap54b. Осуществлена экспрессия рекомбинатных белков BAP-HPlальфа, BAP-Tap54b, BirA-HPlальфа и BirA-Tap54b в клетках НЕК293Т транзиентной трансфекцией с помощью кальций-фосфатного метода и липофектамина с последующим мечением биотином. По результатам иммуноблотта обнаружено ожидаемое усиление сигнала уровня биотинилирования в случаях гомологичной трансфекции в сравнении с гетерологичной. Белки HPlальфа и Tap54b идентифицированы также с помощью тандемной хромато-масс-спектрометрии. На данном этапе проекта получены 4 не описанных ранее плазмидных конструкции, а также новые данные о взаимодействии белков HPlальфа-HP1альфа и Tap54b-Tap54b in vivo.*
