Разработка технологии генетической трансформации для получения холодоустойчивых форм отечественного хлопчатника
Руководитель проекта: Бишимбаева Н.К.
Исполнители проекта: Амирова А.К.
Организация: Институт биологии и биотехнологии растений
Инвентарный номер: 0211РК01304
Регистрационный номер: 0109РК00318
Ключевые слова: РНК, ДНК, Молекулярное клонирование, Трансгены, Хлопчатник,
Выделена тотальная РНК из листьев пшеницы, кукурузы и шпината. Проведен синтез одноцепочечной кДНК гена BADH пшеницы, кукурузы и шпината при помощи метода обратной транскрипции. Проведен синтез полноразмерной двухцепочечной кДНК BADH при помощи ПЦР с использованием в качестве матрицы одноцепочечной кДНК пшеницы, кукурузы и шпината. В результате секвенирования клонированного гена BADH показано, что в нуклеотидной последовательности гена BADH ошибок нет, сайты рестрикции и ген BADH располагаются в последовательности, соответствующей дизайну конструкции. Проведена агробактериальная трансформация отечественного хлопчатника методами трансформации пыльцы и трансформации апексов побегов с использованием штамма, содержащего бинарный вектор встроенным геном шпината. При помощи ПЦР анализа ДНК растений трансформантов показано, что эффективность трансформации метода агробактериальной трансформации пыльцы составляет 2,14%. Все тир метода показали, что растения доноры гена BADH можно расположить в убывающем порядке по устойчивости к низкими положительными температурам следующим образом: пшеницы, шпинат, кукуруза. Получены трансгенные растения хлопчатника с. Мактаарал 4005 с перенесенным геном BADH при помощи методов агробактериальной трансформации пыльцы и апикальных меристем. На данный момент выявлено 7 трансгенных растений с интегрированным геном BADH шпинат. Трансгенные растения проявляли большую стабильность мембран по сравнению с контрольными растениями, что проявилось в меньшей степени выхода электролитов. Оптимизированы методы получения трансгенных форм отечественного хлопчатника с интегрированным геном BADH, способствующим повышению холодоустойчивости растений.