Оптимизация условий генетической трансформации хлопчатника (тип селективной маркерной системы) с использованием репортерного гена глюкуронидазы (GUS-ген)
Full Name of the work head: Н.К.Бишимбаева
Исполнители проекта: Н.К.Бишимбаева
: Ин-т биол. и биотехнол. раст. НЦБ РК
Inventory number: 0208РК00317
Registration number: 0106РК00374
Keywords: Культуры клеток, Хлопчатник, Баллистическая трансформация, Агробактериальная трансформация, Репортерные гены, Селекция сельскохозяйственных культур, Экспрессия генов, Каллусы,
Оптимизированы протоколы баллистической и агробактериальной трансформации для повышения частоты транзиентной экспрессии репортерного GUS-гена в каллусных тканях хлопчатника. Для эффективной доставки ДНК при баллистической трансформации оптимальны расстояние от источника частиц до ткани мишени 9 см и использование осмотика маннита в концентрации 0,4 М. При баллистической трансформации каллусных тканей использование схемы задержанной селекции обеспечивает наибольший процент выживаемости каллусов и сохранение эмбриогенного потенциала. Оптимальными условиями повышения частоты транзиентной экспрессии репортерного GUS-гена при агробактериальной трансформации являются плотность бактериальных клеток 0,6 и время кокультивирования 48 ч. Использование схемы градационной селекции оптимально для сохранения морфогенного потенциала каллусов и сокращения времени отбора трансформированных каллусов. Получены каллусные ткани хлопчатника Махтаарал 4005, проявляющие транзиентную экспрессию перенесенного репортерного GUS-гена.
