Отработан состав реакционной смеси для определения точного размера амплифицированного фрагмента методом капиллярного гель-электрофореза. Определена частота встречаемости аллельных вариантов микросателлитных локусов в генотипах КРС аулиекольской и казахской белоголовой породы. С использованием 12 микросателлитных маркеров было обнаружено 47 аллелей у аулиекольской породы и 44 аллеля у казахской белоголовой породы. Создана панель микросателлитных локусов для генотипирования КРС аулиекольской и казахской белоголовой породы. Создана мультиплекс тест-системы для выявления генетического профиля крупного рогатого скота. Проведено генотипирование крупного рогатого скота с использованием разработанной мультилокусной тест-системы.*

Исследованы сорта, коллекционные и селекционные линии озимого тритикале для оценки исходного селекционного материала по хозяйственно-ценным признакам (урожайность и короткостебельность), генному составу и генетическому разнообразию проламин- и глютелинкодирующих локусов. Проведена идентификация исходных родительских форм по спектрам запасных белков. Определен состав высокомолекулярных глютенинов коллекционных сортообразцов тритикале методом электрофореза и ДНК маркеров. Проведен скрининг коллекционных и селекционных линий тритикале на присутствие аллелей гена короткостебельности. В полевых испытаниях высота растений контрольного и конкурсного питомников варьировала от 82 см. (Т-826-1) до 125 см. (Т-989-1, Т-966). Из образцов контрольного питомника выделились номера, которые показали достаточную урожайность при низкорослости. Результаты проведенных исследований позволят на 2-3 года сократить сроки создания сорта и на 15-20% снизить затраты в процессе селекции. Прирост урожайности за счет снижения полегаемости сорта составит в среднем 5 ц/га.*

Для разработки высокоэффективной системы идентификации сортов, форм, гибридов, линий регенерантов пшеницы с использованием современных ДНК-маркеров, а также создания нового сорта мягкой пшеницы с использованием методов биотехнологии и молекулярного маркирования, исследованы сортообразцы из питомника КАСИБ-12, предоставленные представительством СИММИТ в Казахстане, а также перспективные линии регенерантов и сомаклональные варианты яровой мягкой пшеницы, созданные методами биотехнологии. В результате исследований проведена идентификация генетической оригинальности сортов с использованием информативных IRAP-праймеров, которые могут быть использованы для выявления генетического полиморфизма. Проведена селекционная оценка линий регенерантов, созданных методами биотехнологии в различных полевых условиях степной и лесостепной зоны Северного и Центрального Казахстана, для отбора наиболее перспективных линий пшеницы. По итогам селекционной оценки конкурсного и экологического испытания были выделены линии для производственного сортоиспытания с целью дальнейшей передачи в Государственное сортоиспытание.*

Рассмотрены биопрепараты, приготовленные на основе углеводородокисляющих микроорганизмов. Разработаны концентрированная и сухая формы биопрепаратов на основе активного штамма - нефтедеструктора Rhodococcus erythropolis В12. Отработаны условия хранения и транспортировки биопрепаратов. Проведено масштабирование процесса культивирования активного штамма - нефтедеструктора Rhodococcus erythropolis В12. Наработана опытная партия сухой и жидкой форм биопрепаратов. Получено токсиколого-гигиеническое заключение о непатогенности активного штамма - нефтедеструктора, входящего в состав препарата.*

Исследована гидролаза АррА и разработана технология получения ферментного препарата на основе рекомбинантных гидролаз для использования в качестве кормовой добавки. Создана генетическая экспрессионная конструкция рАррА, содержащая ген фосфогидролазы аррА. Получен рекомбинантный штамм-продуцент гидролазы ArcticExpress(DE3)/pAppA. Оптимизированы условия культивирования штамма и индукции белка. Подобраны условия лизиса и выделения рекомбинантной фосфогидролазы АррА. Определена биохимическая активность рекомбинантного фермента. Наработана опытная партия ферментного препарата в количестве 100 мг.*

Проведены исследования по получению моноклональных антител к рекомбинантному белку Cu/Zn-SOD возбудителя бруцеллеза человека и получению конъюгатов моноклональных антител (МКА) с коллоидными наноразмерными маркерами. Проведены экспериментальные исследования по получению штаммов - гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела к рекомбинантному белку Cu/Zn-SOD. В результате исследований установлено, что наибольший выход рекомбинантного белка Cu/Zn-SOD был получен при 0,2 мМ IPTG и инкубации культуры с индуктором в течение 6 часов. Экспериментально обнаружено, что в данных условиях происходит усиленный синтез белка с молекулярной массой 20,8 кДа. Продуктивность наиболее активных и стабильных линий гибридом 2F5, 2Н8, ЗВ7 в условиях in vitro определялась в течение 8 дней по накоплению антител в культуральной жидкости (супернатанте клеток) и составила от 25 мкг/мл (1 сутки) до 125-250 мкг/мл (7-8 сутки культивирования), что свидетельствует об устойчивом синтезе МКА клетками испытуемых гибридом in vitro. Получен золь коллоидного золота, средний диаметр частиц которого составил 30 - 5 нм и оптимален для сорбции белка и последующей миграции полученного комплекса через поры мембран иммунохроматографической тест-полоски.*

Рассмотрена работа по получению рекомбинантных белков: белка-носителя, образующего вирусоподобные частицы (HBcAg), и рекомбинантного антигена в форме вирусоподобных частиц, представляющих на поверхности пептид. В результате исследования были получены рекомбинантный HBcAg и рекомбинантные белки E10(Ep+Cys), Ell(Ер) и E12(Ep+TrpZip). Белки E10(Ep+Cys), Ell(Ер) и E12(Ep+TrpZip) содержат вставку Ер и различаются последовательностями линкеров, фланкирующих Ер. Разработан протокол выделения и очистки рекомбинантных антигенов с использованием металлоаффинной хроматографии, гель-фильтрации, ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы и осаждением вирусоподобных частиц полиэтиленгликолем. Полученными антигенами иммунизировали мышей. Наличие в иммунных сыворотках антител, реагирующих с иммуноглобулином Е человека, подтверждено в иммуноферментном анализе с использованием в качестве иммобилизованного антигена очищенного IgE человека.*

Исследованы методы молекулярного типирования M.tuberculosis для комплексной характеристики штаммов M.tuberculosis, циркулирующих на территории Казахстана в гражданском и пенитенциарном секторах, а также в очагах туберкулезной инфекции. Собраны 185 клинических изолятов M.tuberculosis с различным спектром лекарственной устойчивости для проведения генетического анализа. Проведено секвенирование генов rpoB, katG, промоторной области fabG-inhA, обуславливающих устойчивость к основным противотуберкулезным препаратам - изониазиду и рифампицину, собранных клинических изолятов M.tuberculosis. Проведено генотипирование по 24 MIRU - VNTR локусам 185 клинических изолятов M.tuberculosis. Проведенный статистический анализ аллельного полиморфизма каждого из 24 MIRU - VNTR локусов клинических изолятов M.tuberculosis в отдельности выявил различную вариабельность числа повторов в том или ином локусе. Разработана оптимальная схема типирования на основе MIRU - VNTR анализа M.tuberculosis для комплексной характеристики штаммов, циркулирующих на территории Казахстана в гражданском и пенитенциарном секторах, а также в очагах туберкулезной инфекции.*

Исследована геномная ДНК, выделенная из цельной крови пациентов с диагнозом рак молочной железы и условно здоровых женщин для оценки ассоциации уровня кальция, полиморфизмов генов VDR и РТН и риска рака молочной железы у женщин Казахстана. Проведен дизайн праймеров и зондов для типирования полиморфизмов генов VDR, РТН методом ПЦР в режиме реального времени. Был пополнен банк ДНК больных с раком молочной железы (экспериментальная группа), практически здоровых лиц (контрольная группа) и проведено генотипирование полиморфизмов гена VDR и РТН. Проведены исследования по биохимическим показателям, в том числе по уровню кальция. На основании анализа полученных данных выявили связь полиморфизмов с риском РМЖ (в случае VDR Fokl), для остальных полиморфизмов требуются увеличить количество анализируемых образцов.*

Для изучения генетического разнообразия возбудителя бруцеллеза животных в Республике Казахстан на основе анализа множественных тандемных повторов, исследованы 209 инактивированных коллекционных штаммов бруцелл, выделенных в ходе реализации проекта с использованием микробиологических, молекулярно-генетических и информационных методов. Определена родовая принадлежность штаммов методом анализа нуклеотидной последовательности 16S rRNA гена, что позволило выявить недостоверную идентификацию или контаминацию 37 штаммов бруцелл (17,7%) на родовом уровне. ДНК 172 штаммов бруцелл была использована для видовой идентификации методом мультиплексного ПЦР. В результате проведенных исследований была установлена видовая принадлежность и собрана коллекция ДНК от 5 видов бруцелл.*